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ELISA檢測樣品的處理方法
發(fā)布時(shí)間： 2016-05-09 點(diǎn)擊次數(shù)： 1428次ELISA實(shí)驗(yàn)成功的前提是樣本的正確處理加上實(shí)驗(yàn)途中正確的操作，正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準(zhǔn)確性的*步。通常我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的，如血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等，不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準(zhǔn)確性的*步，下面就簡單介紹一下不同類型的樣本的處理方法。
1、 血清
血清是zui常用于ELISA檢測的一類樣本，處理也比較簡單。
用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標(biāo)本，將試管或離心管室溫放置2小時(shí)或4℃放置一晚，使血清析出。（將試管或離心管傾斜放置，使液面橫截面增大，能使血清更大程度的析出。）4℃ 1000×g離心20分鐘，仔細(xì)收集上清。建議將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
采血過程中應(yīng)避免溶血，因?yàn)榧t細(xì)胞裂解時(shí)會釋放具有過氧化酶活性的物質(zhì)，在以HRP為標(biāo)記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色，而導(dǎo)致檢測的不準(zhǔn)確性。同時(shí)也應(yīng)避免細(xì)菌污染，因?yàn)榫w內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導(dǎo)致檢測的假陽性。
2、 血漿
用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標(biāo)本，標(biāo)本采集后30min內(nèi)4℃ 1000×g離心15min，取上清即血漿。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本。
常用的抗凝劑為EDTA、肝素鈉和枸櫞酸鈉等，檢測時(shí)還應(yīng)仔細(xì)閱讀試劑盒說明書，檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。
3、 細(xì)胞培養(yǎng)上清
取細(xì)胞培養(yǎng)上清到離心管，1000×g離心20min，除去細(xì)胞碎片及雜質(zhì)，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
4、 尿液、唾液等其他液體生物樣本
1000×g離心20min，取上清即可檢測。
總的來說，因?yàn)镋LISA只能檢測可溶性蛋白的含量，所以應(yīng)保證所有樣本均為澄清的液體，沉淀或懸浮物都應(yīng)離心去除。
為了保證檢測的準(zhǔn)確性，保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個(gè)月內(nèi)檢測；4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測。另外，還應(yīng)保證樣本不含NaN3，因?yàn)镹aN3會抑制HRP的活性，從而導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。
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