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ELISA試劑盒實驗“花板”問題分析
發(fā)布時間： 2013-10-30 點(diǎn)擊次數(shù)： 1334次ELISA試劑盒結(jié)果“花板”的問題對檢測數(shù)據(jù)造成了很大影響，往往會使檢測者做出誤判，是實驗中必須要注意和避免的。
使用ELISA試劑盒對血液HBsAg-HCV-HIV及梅毒等實驗檢測的結(jié)果中，空白和陰性，陽性對照以及室內(nèi)質(zhì)控孔結(jié)果正常，根據(jù)衛(wèi)生部臨檢中心提供的數(shù)據(jù)，HBsAg0.5ng1ng-HCV-HIV梅毒正常范圍均為2NCU，但血液標(biāo)本孔的OD值比較高（大多數(shù)OD值≥0.070）。標(biāo)本的陽性率很高，每板除對照孔外，有時陽性高達(dá)10孔之多，而大多數(shù)真陽性標(biāo)本都出現(xiàn)弱陽性結(jié)果。
針對這種“花板”現(xiàn)象我們通過多次實驗的分析和判斷，總結(jié)了一些經(jīng)驗，分析如下：
1 標(biāo)本、試劑、儀器
1.1 標(biāo)本 出入境人員的血液標(biāo)本。
1.2 試劑 HBsAg、HCV、HIV、梅毒試劑均為不同廠家的ELISA試劑盒。
1.3 儀器 LD4-2型腦心機(jī)BID RAD1575型洗板機(jī)BID RAD550酶標(biāo)儀。
2 方法
所有被檢出入境人員的血液標(biāo)本，按照各個廠家提供的ELISA試劑盒說明書進(jìn)行HBsAg-HCV-HIV梅毒等檢驗項目操作。所有試劑均在有效期內(nèi)使用。
3 結(jié)果
所使用不同廠家的試劑有時會出現(xiàn)“花板”問題。
4 分析
在所有標(biāo)本進(jìn)行檢測的過程中，所用的儀器及加樣過程都處于正常狀態(tài)的情況下，步驟均按照各種試劑說明書的要求去做，排除實驗所用儀器和操作步驟對實驗結(jié)果的影響外，ELISA試劑盒內(nèi)的空白、陰性和陽性對照以及室內(nèi)質(zhì)控值都很正常，只有檢測的血液標(biāo)本情況異常。根據(jù)國家和疾控中心報告陽性率的比例不應(yīng)該是很高的情況下，HBsAg在用ELISA之前都經(jīng)過了快速金標(biāo)試劑的檢測，陽性標(biāo)本得到了一定的控制。因此，原因可能是在標(biāo)本的處理，特別是放置時間、離心速度和離心時間方面的問題。所以，標(biāo)本的處理就成為實驗結(jié)果的主要可疑因素。
為了避免“花板”現(xiàn)象的出現(xiàn)，降低檢測的假陽性率，獲取準(zhǔn)確的實驗結(jié)果，應(yīng)選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好、批間差小、操作方便省時的ELISA試劑。
實驗過程中應(yīng)該注意的問題:
（1）抽取樣本時應(yīng)抽出足夠檢驗量的血液標(biāo)本，按比例加抗凝劑，便于離心，得到足夠的血清（血漿）。
（2）血液標(biāo)本應(yīng)置于室溫下1～2h，使血液凝固收縮，然后離心檢測或讓血液后再檢測。這樣才能使得血液充分收縮，讓標(biāo)本中的非特異性物質(zhì)所致的假陽性率降至zui低。
（3）檢測之前，加大離心轉(zhuǎn)速，盡量延長時間，使血細(xì)胞和纖維蛋白充分沉淀，讓血細(xì)胞與血清*分離。
（4）加樣時不能加入紅細(xì)胞或纖維蛋白，要按照操作說明書去做，否則會影響實驗結(jié)果。
（5）封板溫育時，各孔一定要封嚴(yán)，防止陽性標(biāo)本的液體蒸發(fā)，產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。
（6）手工洗板時應(yīng)注意液體被濺出或孔與孔之間的液體溢出，連成整體液面后產(chǎn)生“花板”。用洗板機(jī)洗板時應(yīng)防止針口有纖維蛋白或異物，這些異物在洗板的過程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。
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