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    小鼠β-防御素(β-DF)ELISA試劑盒原理

    發(fā)布時(shí)間: 2014-07-29  點(diǎn)擊次數(shù): 1780次

    小鼠β-防御素(β-DF)ELISA試劑盒    Mouse β-Defensins,β-DF ELISA Kit    ,規(guī)格:96T/48T,產(chǎn)品別名:    小鼠β-防御素(β-DF)檢測(cè)試劑盒 
    小鼠β-防御素(β-DF)ELISA試劑盒原理的簡(jiǎn)要說明書:β-Defensin,β-防御素。β-Defensin是一種富含半胱氨酸陽離子多肽,含有 6個(gè)穩(wěn)定的半胱氨酸,分別以 l-6,2-4,3一5連接形成三個(gè)分子的二硫鍵,構(gòu)成穩(wěn)定的反相平行的三股β一片層結(jié)構(gòu)。二流鍵可以使小分子防御素緊密聯(lián)結(jié)以防御蛋白酶水解,所以在富含蛋白的吞噬溶酶體環(huán)境中仍能保持其特性,這也是防御素區(qū)別與其他抗微生物肽的主要因素。pBD-1除上述結(jié)構(gòu)外,還含有2個(gè)精氨酸、7個(gè)賴氨酸,且在成熟的肽中不含有陰離子殘基。預(yù)先包被的β-Defensin(β-防御素)抗體為多克隆β-Defensin(β-防御素)抗體。檢測(cè)相β-Defensin(β-防御素)抗體也為多克隆β-Defensin(β-防御素)抗體,經(jīng)生物素(biotin)標(biāo)記。樣品和生物素標(biāo)記β-Defensin(β-防御素)抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后,PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng);經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的待測(cè)因子呈正相關(guān)。      
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    小鼠β-防御素(β-DF)ELISA試劑盒操作步驟
    1.使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
    2.根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
    3.加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。
    4.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
    5.每孔加入60ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
    6.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
    7.每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
    8.取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
    9.在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

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