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ELISA實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)假陽性結(jié)果和假陰性結(jié)果的原因
發(fā)布時(shí)間： 2023-10-17 點(diǎn)擊次數(shù)： 2596次ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。除了盒子本身質(zhì)量外，操作中很多因素都影響試驗(yàn)的正常結(jié)果。*常出現(xiàn)的問題是顯色淡，靈敏度偏低、重復(fù)性不佳、假陽性結(jié)果和假陰性結(jié)果，不管出現(xiàn)什么樣的結(jié)果，不但浪費(fèi)客戶的金錢、樣本、精力，更重要的是對(duì)臨床做出了危險(xiǎn)判斷。在這里我們分析ELISA試驗(yàn)非正常檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生的常見原因，并探討其解決辦法，以提高檢測(cè)質(zhì)量。
1. 標(biāo)本的采集與保存
當(dāng)標(biāo)本采集保存不當(dāng)產(chǎn)生溶血時(shí)，紅細(xì)胞中的血紅蛋白釋放到血清中，血紅蛋白具有過氧化物酶的性質(zhì)，其通過吸附或“PP效應(yīng)"
(蛋白質(zhì)間相互吸附的現(xiàn)象)結(jié)合后，可催化、B液顯色而造成假陽性標(biāo)本采集保存不當(dāng)致細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，會(huì)產(chǎn)生假陽性反應(yīng);標(biāo)本在冰箱中保存時(shí)間過長(zhǎng)導(dǎo)致血清IgG聚合，易使間接法的試驗(yàn)本底加深。因此，標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。
反復(fù)凍融血清會(huì)使抗體效價(jià)跌落，所以測(cè)抗體的血清標(biāo)本如需保存做多次檢測(cè)，宜少里分裝凍存。
2.加樣
如果ELISA試驗(yàn)樣品稀釋液少加或血清多加，都會(huì)引起本底增高。對(duì)于間接法來說，受上述兩個(gè)因索影響更大。因?yàn)檠逯惺軝z的特異性IgG只占IgG中的一小部分。IgG的吸附性很強(qiáng)，非特異性IgG可直接吸附到固相載體上，有時(shí)也可吸附到包被抗原的夫面。這些非特異性的IgG均可以和酶標(biāo)二抗發(fā)生反應(yīng)而造成較高陰性本底或假陽性。如果加入的血清過多，高于規(guī)定的稀釋倍數(shù)，極易造成高值陰性。反之，造成假陰性。