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Elisa實(shí)驗(yàn)中血清的采集及注意事項(xiàng)
發(fā)布時(shí)間： 2018-11-09 點(diǎn)擊次數(shù)： 3039次ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中，對(duì)于采集血清經(jīng)常碰到很多問(wèn)題：
1、標(biāo)本采集后什么時(shí)候開(kāi)始離心，有說(shuō)采集半小時(shí)后離心的，還有說(shuō)采集全血后在4℃過(guò)夜，再離心，如果采集后7-8小時(shí)再離心可以嗎？
2、離心時(shí)多少轉(zhuǎn)、離心幾分鐘比較合適
血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP 為標(biāo)記的ELISA 測(cè)定中，溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)。一般說(shuō)來(lái)，在5 天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃，標(biāo)本在冰箱中保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致血清IgG 聚合，使間接法的試劑本底加深。超過(guò)一周測(cè)定的需-20℃保存。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡?；鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過(guò)濾，澄清后再檢測(cè)。反復(fù)凍融會(huì)使抗體效價(jià)跌落，所以測(cè)抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測(cè)，宜少量分裝冰存。保存血清自采集時(shí)就應(yīng)注意無(wú)菌操作，也可加入適當(dāng)防腐劑。
實(shí)驗(yàn)中，標(biāo)本離心越早越好，但多數(shù)標(biāo)本要30分鐘后才凝集完畢，離心時(shí)間在2小時(shí)內(nèi)完成，（尤其生化）時(shí)間太長(zhǎng)血液中的細(xì)胞成分會(huì)分解血漿中有機(jī)成分，離子也會(huì)發(fā)生轉(zhuǎn)移造成誤差；4度冷藏雖能降低紅細(xì)胞活性但細(xì)胞還會(huì)進(jìn)行緩慢無(wú)氧酵解，血糖會(huì)明顯減低，冷藏時(shí)需分離血清儲(chǔ)存；對(duì)于酶免試驗(yàn)影響較小，但時(shí)間太長(zhǎng)也會(huì)引起偏差如蛋白質(zhì)變性，水分蒸發(fā)造成誤差離心速度一般要求1500~3000轉(zhuǎn)之間（25000轉(zhuǎn)），離心速度低會(huì)離心不*，速度過(guò)快容易溶血，一般離心5~15分鐘即可（約10分鐘）。