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實(shí)驗(yàn)方式大起底
發(fā)布時(shí)間： 2017-03-27 點(diǎn)擊次數(shù)： 1978次ELISA試劑盒大起底
從樣品中分離提純同種試劑盒，是許多下游應(yīng)用的關(guān)鍵一步，分離得到的細(xì)胞可以用于基因鑒定、大鼠小鼠ELISA試劑盒計(jì)數(shù)、生化分析、蛋白分離、宿主-病原體互作以及細(xì)胞間相互作用等研究。
一款合適的分離試劑盒可以說(shuō)是實(shí)驗(yàn)成功的保障，因?yàn)橹挥蝎@得正確的ELISA試劑盒，下游的分析結(jié)果才可能準(zhǔn)確。目前，市面上有多種多樣的分離試劑盒可供選擇，它們的主要區(qū)別在于分離方法和篩選標(biāo)志。那么，如何選擇自己的細(xì)胞分離試劑盒呢？希望本文能為你提供一些幫助。
正向選擇VS負(fù)向選擇
試劑盒分離試劑盒的工作原理主要有兩種，正向選擇和負(fù)向選擇。正向選擇的試劑盒直接結(jié)合的抗體來(lái)進(jìn)行捕獲。這種抗體通常與磁珠相連，可以利用磁鐵將懸液中的抗體-磁珠-復(fù)合物提取出來(lái)，再通過(guò)二抗將磁珠與目標(biāo)分開(kāi)。負(fù)向選擇的試劑盒也采用類似的抗體包被磁珠，不過(guò)這種試劑盒是通過(guò)去除樣品中的非目的，來(lái)間接捕獲目的。
這兩種細(xì)胞分離試劑盒如何取舍，主要取決于目標(biāo)細(xì)胞的表面是否具有特異性強(qiáng)的篩選標(biāo)志。這樣的篩選標(biāo)志能夠?qū)崿F(xiàn)特異性的捕獲，避免所獲得的細(xì)胞被非目標(biāo)細(xì)胞污染。如果你的目標(biāo)細(xì)胞剛好具有這樣的篩選標(biāo)志，那么正向選擇的細(xì)胞分離試劑盒就是*選擇。但如果目標(biāo)細(xì)胞并不具有特異性強(qiáng)的篩選標(biāo)志，那我們還是選用負(fù)向選擇的細(xì)胞分離試劑盒。
篩選標(biāo)志的確定
通過(guò)PubMed等數(shù)據(jù)庫(kù)中的文獻(xiàn)，我們一般可以確定在目標(biāo)上表達(dá)的篩選標(biāo)志。如果文獻(xiàn)中找不到適合自己的表面標(biāo)志，我們還可以用目標(biāo)的DNA序列進(jìn)行BLAST搜索。BLAST搜索結(jié)果會(huì)顯示，目標(biāo)細(xì)胞上可能表達(dá)的表面標(biāo)志，在此基礎(chǔ)上可以選取用于捕獲的細(xì)胞表面蛋白。舉例來(lái)說(shuō)，對(duì)一個(gè)T進(jìn)行BLAST搜索，結(jié)果會(huì)顯示該是否表達(dá)CD4或CD8。在得知目標(biāo)表達(dá)CD4之后，我們可以先對(duì)樣品進(jìn)行一個(gè)免疫實(shí)驗(yàn)（如ELISA），以檢驗(yàn)BLAST搜索的結(jié)果。一旦證實(shí)目標(biāo)的確表達(dá)CD4，我們就可以用相應(yīng)試劑盒來(lái)篩選CD4陽(yáng)性的T細(xì)胞。
一般流程
對(duì)于一個(gè)旨在分離CD4陽(yáng)性T的試劑盒來(lái)說(shuō)小鼠ELISA試劑盒，操作流程主要有以下幾步。首先，將樣品與anti-CD4抗體包被的磁珠共同孵育，使抗體與CD4+ T結(jié)合。然后洗去不需要的非目標(biāo)（即不表達(dá)CD4的），留下磁珠-抗體-復(fù)合物。ELISA試劑盒將上述復(fù)合物與能結(jié)合anti-CD4抗體的二抗一起孵育胞，形成磁珠-抗體-二抗復(fù)合物。我們可以用磁鐵去除這種磁珠-抗體-二抗復(fù)合物，而所有的CD4+細(xì)胞留在上清中。zui后，只需將上清轉(zhuǎn)移就可以進(jìn)行下游研究了。